Cromatografía de pigmentos vegetales

     Cromatografía de hojas de espinaca.

Materiales:

-mortero

-embudo

-matraz

-papel de filtro

-alcohol

-hojas de espinaca

Procedimiento:

1.    Lavar las hojas de espinaca, retirar los nervios y ponerlas en un mortero junto con el alcohol y una pequeña cantidad de carbonato cálcico (que evita la degradación de los pigmentos fotosintéticos). Triturar la mezcla hasta que las hojas se decoloren y el disolvente adquiera un color verde intenso.

2.    Filtrar con un embudo y papel de filtro.

3.    Colocar el filtrado en una placa de petri y sobre ella poner un rectángulo de unos 15cm de ancho por 10cm de alto doblado en V para que se mantenga en pie sobre la placa de Petri. Dejar así el montaje y esperar unas horas.

Los pigmentos se irán separando según su adsorción. Al observar el papel, vemos cuatro bandas o zonas, que corresponden a los distintos pigmentos fotosintéticos presentes en las hojas de espinaca. Según su grado de solubilidad con el alcohol se reconocen estas bandas y en este orden:

                    -clorofila b

                    -clorofila a

                    -xantofila

                    -carotenos

mitosis en células de raíz de cebolla

Mitosis en células de raíz de cebolla

Materiales:

-portaobjetos. –mechero de alcohol.

-cubreobjetos. –tijeras.

-cubeta de tinción. –papel de filtro.

-aguja enmangada. –vaso de precipitados.

-pinzas y palillos. –vidrio de reloj.

-frasco lavador. Orceína A y B.

Procedimiento:

1. Llenar un vaso de precipitados con agua y colocar un bulbo de cebolla sujeto con dos o tres palillos de manera que la parte inferior quede inmersa en el agua. Al cabo de 3-4 días aparecerán numerosas raicillas en crecimiento de unos 3 o 4 cm. de longitud.
2. Cortar con las tijeras unos 2-3mm. del extremos de las raicillas y depositarlo en un vidrio de reloj en el que se han vertido 2-3ml de orceína A.
3. Calentar suavemente el vidrio de reloj a la llama del mechero durante unos 8 minutos, evitando la ebullición, hasta la emisión de vapores tenues.
4. Con las pinzas tomar uno de los ápices o extremos de las raicillas y colocarla sobre un portaobjetos, añadir una gota de orceína B y dejar actuar durante 1 minuto.
5. Colocar el cubreobjetos con mucho cuidado sobre la raíz. Con el mango de una aguja enmangada dar unos golpecitos sobre el cubre sin romperlo de modo que la raíz quede extendida.
6. Sobre la preparación colocar unas tiras de papel de filtro, 5 o 6. Poner el dedo pulgar sobre el papel de filtro en la zona del cubreobjetos y hacer una suave presión, evitando que el cubre resbale. Si la preparación está bien asentada no hay peligro de rotura por mucha presión que se realice.
7. Observar al microscopio. La orceína A reblandece las membranas celulares y la B completa el proceso de tinción. Con la presión sobre el porta de la preparación se logra una extensión y difusión de las células del meristemo de la cebolla.

Preparación de la Orceína A y B.

1. orceína A: tinción de cromosomas.

-orceína…………………………………….2 gramos.

-ácido acético………………………………45,8 ml.

-ácido clorhídrico 1mol/L………………….8,3ml.

-agua………………………………………..45,8ml.

2. orceína B: tinción de cromosomas.

-orceína………………………………………2 gramos.

-ácido acético………………………………..55ml.

-agua…………………………………………55ml.

Extracción de ADN en un tomate.

Materiales:

-tomate

-agua destilada

-sal

-bicarbonato sódico

-detergente líquido

-alcohol

-batidora

-vaso

-tubo de ensayo

Procedimiento:

Preparar un primer compuesto con 120 ml de agua destilada, 1,5g de sal, 5g de bicarbonato sódico y 5 ml de detergente líquido.

1. Tomar el tomate y cortarlo en cuadraditos.
2. Triturar el tomate con un poco de agua en la batidora accionando las cuchillas a impulsos de 10 segundos.
3. Mezclar en un recipiente 5ml del triturado con 10 ml del primer compuesto y agitar vigorosamente durante al menos 2 minutos. Separa después los restos vegetales más grandes.
4. Retirar 5ml de la mezcla a un tubo de ensayo y añadir con pipeta 10ml de alcohol. El alcohol quedará flotando.
5. Se introduce la punta de una varilla estrecha hasta justo debajo de la separación entre el alcohol y la mezcla. Remover la varilla y poco a poco se irán enrollando los fragmentos de mayor tamaño de ADN. Pasado un minuto retirar la varilla atravesando la capa de alcohol con lo cual el ADN quedará adherido a su extremo.